Enterococcus sp.

У меня обнаружены enterococcus sp. 10^5 KOE /тамп.
5 месяцев пытаюсь вылечиться
2 раза лечилась клиндацином 7 — 10 дней затем лактожиналь по 1 свече на ночь и тержинаном 14 дней, затем лактожиналь.
1 раз клиндацин помог на 14 дней, потом выделения вновь начались.
2-рой раз клиндацин не помог, выделения как были так и остались.
В мазке лейкоциты повышены в шейке матке (50 лейкоцитов)
После выставления свечей тержинан 14 дней — выделения прекратились на 2 недели и начались вновь.
В данное время вставляю 11-тый день свечи бетадин.. Выделения продолжаться..
Подмываюсь правильно 2 раза в день, соблюдаю гигиену.
Использую специальный гель для интимной гигиены с молочной кислотой.
Ничего не помогает, планирую беременость в ближайшие месяцы. Что делать, как вылечиться? Подскажите пожалуйста

О патогенности энтерококков впервые упоминается в конце XIX в.: MacCallum и Hastings выделили этот микроорганизм из биоматериала больного острым эндокардитом и дали название Micrococcus zymogenes на основании его ферментативных свойств. Микроорганизм был устойчив к нагреванию до 60 °С, а также к различным антисептикам, включая карболовую кислоту и хлороформ. Также было установлено, что при внутрибрюшинном введении белым мышам этот микроб вызывал летальный исход, в экспериментальных условиях Micrococcus zymogenes был причиной эндокардита.

Спустя столетие энтерококки приобрели существенное значение и заняли 2-е место после Е. coli, составив более 12% всех возбудителей нозокомиальных инфекций (НКИ). В последние го/ты, по данным зарубежных авторов, энтерококки как причина НКИ в клиниках интенсивной терапии занимают 3-е место. Энтерококки по антигенному строению (группоспецифическая тейхоевая кислота) отнесены R. Lancefield в начале 1930-х годов к стрептококкам группы D. Четкие отличия энтерококков от стрептококков по ряду признаков указывают на необходимость выделить энтерококки в самостоятельный род.

Это было подтверждено в 1984 г. в сравнительных исследованиях по гибридизации нуклеиновых кислот, а также анализом иммунотипировапия белкового комплекса энтерококков, в котором не обнаружено родства со стрептококками других серологических групп.

В настоящее время Enterococcus spp. разделяют на пять групп:
Группа I — Е. avium, E. gilvus E. malodoralus, Е. pollens, E.pseudoaxnum, Е. raffinosus, E.saccharolyticus.
Группа II — E.faecalis, E.faecium, Lactococcus spp., E. casseliflavus, E.galUnarum, E. mandtii.
Группа III — E. dispar, E. durans, E. hirae, E. porcinus, E. ratli.
Группа IV — E. asini, E. cecorum, E. sulfureus. Группа V E. columbae, Vagococcus spp.

Энтерококки окрашиваются по Граму положительно, представляют собой кокки, факультативные анаэробы. Enterococcus spp. это часть нормальной микрофлоры слизистых оболочек ЖКТ и половых путей женщин. Некоторые особенности этого микроорганизма обеспечивают ему длительное выживание в условиях окружающей среды. Энтерококки способны активно приспосабливаться к различным неблагоприятным факторам, передаваться в условиях стационара от человека к человеку через руки, инструменты. В литературе описаны случаи, когда источником НКИ оказались мобильные телефоны, стетоскопы, термометры и прочие объекты нозокомиальной среды.

Enterococcus spp. сохраняют жизнеспособность в течение не менее педели на различных поверхностях окружающей среды: на продуктах (например, па сыре — 180 дней), в почве — до 77 дней, на загрязненной одежде до 90 дней; при температуре -70 °С чистая культура энтерококка выживает в течение нескольких лет, на поверхности агара при +4°С — нескольких месяцев. Энтерококки утрачивают жизнеспособность при автоклавировании при температуре 121 С через 15 мин, при обработке сухим жаром при 160 -170 °С — через час. Эффективные дезинфектанты — 1% гипохлорит, формальдегид, 70% этиловый спирт, 2% глутаральдегид, препараты йода.

Энтерококки способны вызывать у человека гнойно-воспалительные процессы различной локализации, которые протекают обычно вяло, хронически. Инфекции человека в основном обусловлены двумя видами энтерококков: E.faecalis (80-90%) и E.faecium (5-15%). Другие виды выделяют из различных патологических биоматериалов значительно реже. В основном сообщения об инфекционных осложнениях энтерококковой природы касаются следующих видов: Е. durans, E. avium, casseliflavus, E. gallinarum, Е. raffinosus и Е. hirae. Основным местом обитания Е. faecalis служит кишечник человека, E.faecium — кишечник свиней. Распространенность энтерококков в окружающей среде объясняется также их природной устойчивостью к различным классам антимикробных препаратов, включая амипогдикозиды, b-лактамы и хинолоны.

Например, резистентность энтерококков к аминогликозидам есть следствие их способности блокировать проникновение препаратов через клеточную стенку. Впрочем, применение аминогликозидов возможно, но в комбинации с препаратами, способными проникать через клеточную стенку микроорганизмов. Следует заметить, что в настоящее время отмечается быстрое распространение штаммов энтерококков с высоким уровнем устойчивости к аминогликозпдам (> 1000 мкг/мл для стрептомицина и >500 мкг/мл для гентамицина), по пока это явление не до конца изучено.

Колонизация слизистых оболочек основное условие развития энтерококковой инфекции. Энтерококки, как уже отмечалось, колонизируют слизистую оболочку ЖКТ у здоровых людей, входя в состав микрофлоры фекалий (103—108 колониеобразующих единиц [КОЕ] в 1 г). Между энтерококками и эпителиальными клетками организма хозяина существует тесная связь, которая препятствует выведению их вследствие естественной подвижности кишечника. Большинство известных микроорганизмов растет в узком диапазоне значений pH, близких к нейтральному. Энтерококки должны преодолеть кислую среду желудка, чтобы попасть в нижние отделы кишечника, что возможно благодаря устойчивости этих микробов к низким значениям pH среды их обитания (pH 3,2-4,8 в течение 15-30 мин).

Прикрепленные бактерии гораздо легче, чем свободноплавающие, образуют кооперативные структуры с другими бактериями. Это особенно важно для развития синтрофной кооперации (вариант кооперации, при которой оба партнера полностью зависят друг от друга в своей жизнедеятельности). В прикрепленных бактериальных сообществах имеются более существенные возможности обмена плазмидами или эписомами. Плазмиды — это специальные внехромосомные генетические элементы, ответственные за внехромосомную передачу резистентности к одному или нескольким антимикробным препаратам. Энтерококки способны прикрепляться к эпителиальным клеткам различных отделов тонкой и толстой кишки, а затем проникать из просвета тонкой кишки через мезентериальные лимфоузлы в печень, селезенку.

Лечение антимикробными препаратами предрасполагает к развитию энтерококковых инфекций. Антибиотик-индуцированный усиленный рост Е. faecalis при соответствующих условиях (например, мукозит, энтеропатия) может привести к проникновению микроорганизма в кровь, что часто проявляется лихорадкой неясной этиологии. Механизм этот до конца не изучен.

Первый активный защитный барьер хозяина представляют различные типы клеток и гуморальных факторов иммунной системы, которые атакуют проникающие микроорганизмы. Фагоциты поглощают и лизируют патогенные микроорганизмы, очищая организм от них. Фагоцитированные микробные клетки оказываются внутри вакуоли (фагосомы), которая сливается с лизосомами и образует фаголизосому, внутри которой микробы подвергаются воздействию бактерицидных механизмов, зависящих и не зависящих от кислорода. В фаголизосоме образуются токсичные формы кислорода (супероксид-анион, пероксид водорода, синглетный кислород и гидроксил-радикал), которые вместе с другими антимикробными соединениями и оксидами азота вызывают гибель микроорганизмов.

Некоторые микробы способны избегать действия бактерицидных механизмов. Одно из предположений состоит в том, что фагоцитированные, но не лизированные тканевыми макрофагами энтерококки проникают через стенку кишки в лимфатическую систему, что приводит к системному распространению этого возбудителя.

E. faecalis отличаемся от Е. faecium мощной продукцией супероксид-аниона. Установлено, что основная часть штаммов Е. faecalis образует супероксид-анион, тогда как среди рода E. faecium такие штаммы встречаются менее часто. Покапано, что штаммы Е. faecalis, выделенные из крови больных, вырабатывают супероксид-анион на 60% больше, чем штаммы, выделенные из фекалий. Пока остается неясным, какую роль играет способность вырабатывать супероксид-анион в патогенезе энтерококковых инфекций. Возможно, штаммы энтерококков, отличающиеся мощной продукцией супероксид-аниона, способны лучше использовать среду своего обитания, лучше физиологически адаптированы к утилизации ограниченных ресурсов кишечника в условиях огромной конкуренции, что ведет к усилению их роста.

Готовность колонизировать слизистые оболочки хозяина, уже заселенные другими микробными сообществами, считают одной из загадок нозокомиальных энтерококковых инфекций. В связи с этим можно считать вполне обоснованным мнение, что активное применение цефалоспоринов III поколения — важный фактор риска колонизации и развития, энтерококковой инфекции в условиях стационара. Эти инфекции часто обусловлены полирезистентными штаммами энтерококков экзогенного происхождения, которые вынуждены конкурировать с эндогенными энтерококками за места обитания в организме хозяина. Показано, что госпитальные штаммы могут вырабатывать поверхностный белок новой структуры, который был обнаружен у 40% штаммов при эндокардитах, у 29% штаммов при бактериемии и у 3% штаммов, выделенных из фекалий. Функция этого белка в биологии Е. faecalis пока неизвестна, по не исключено его значение для колонизации экзогенных штаммов энтерококков.

В 10-20% случаев энтерококки выделяются из биоматериалов, исследуемых по поводу интраабдоминальных абсцессов, причем считается, что энтерококки способствуют развитию абсцессов, как правило, только в сочетании с анаэробными микроорганизмами (например, Fusobacierium varium, Bacteroides fragilis). Такая особенность обязательно должна учитываться при выборе антимикробной терапии интраабдоминальных абсцессов.
Энтерококки составляют 8-14% послеоперационных раневых нозокомиальных инфекций (НКИ).

Готовность колонизировать слизистые оболочки хозяина, уже заселенные другими микробными сообществами, считают одной из загадок нозокомиальных энтерококковых инфекций. В связи с этим можно считать вполне обоснованным мнение, что активное применение цефалоспоринов III поколения — важный фактор риска колонизации и развития, энтерококковой инфекции в условиях стационара. Эти инфекции часто обусловлены полирезистентными штаммами энтерококков экзогенного происхождения, которые вынуждены конкурировать с эндогенными энтерококками за места обитания в организме хозяина. Показано, что госпитальные штаммы могут вырабатывать поверхностный белок новой структуры, который был обнаружен у 40% штаммов при эндокардитах, у 29% штаммов при бактериемии и у 3% штаммов, выделенных из фекалий. Функция этого белка в биологии Е. faecalis пока неизвестна, по не исключено его значение для колонизации экзогенных штаммов энтерококков.

Рецензенты:
А.Ф. Мороз, доктор биологических наук, профессор, Заслуженный деятель науки РФ
В.Г. Лиходед, академик Российской академии медико-технических наук, доктор медицинских наук, профессор

Энтерококки, входящие в состав нормальной микрофлоры пищеварительного тракта человека, играют важную роль в обеспечении колонизационной резистентности слизистых. В то же время они являются представителями группы условно-патогенных бактерий, способных вызывать аутоинфекцию, а при накоплении в окружающей среде – приводить к экзогенному инфицированию. В последние годы изучение энтерококков как биологических объектов и оценка их роли в физиологии и патологии человека чаще всего рассматриваются сквозь призму участия энтерококков в возникновении инфекционных заболеваний, количество которых постоянно нарастает. Однако односторонняя оценка микроорганизмов зачастую не позволяет объективно оценить их значение, так как многие из них являются составной частью нормальной микрофлоры и обязательными компонентами привычных пищевых продуктов. Обнаружение у больного энтерококков часто ставит неразрешимые вопросы перед клиницистами в плане определения врачебной тактики. Возник вопрос о безопасности применения в медицинской практике препаратов-пробиотиков, содержащих жизнеспособные симбиотические энтерококки. В данной книге мы постарались рассмотреть проблему энтерококков с разных точек зрения и объяснить причины, определяющие их способность вызывать развитие инфекционного процесса, т.е. возможность проявления патогенных свойств энтерококками различных штаммов одного и того же вида.

Общая характеристика бактерий рода Enterococcus

Энтерококки, ранее относимые к стрептококкам группы D, — многочисленная группа бактерий рода Enterococcus, включающая виды Е. faecalis, Е. faecium, Е. avium, Е. casseliflavus, Е. durans, Е. gallinarum, Е. raffinosus, Е. irae, Е. malodoratus и Е. mundtii. В клиническом материале от человека встречаются Е. faecalis, Е. faecium, Е. gilvus и E. pallens. Энтерококки содержат групповой антиген, который реагирует с антисывороткой стрептококков серогруппы D по Лэнсфилду. Энтерококки других видов, как правило, не обнаруживаются в клиническом материале от людей.

У новорожденных энтерококки выявляются уже с первых дней жизни, и в последующем на первом году, у детей, находящихся на грудном вскармливании, их уровень колеблется от 10 6 до 10 7 КОЕ/г. У детей с искусственным вскармливанием их уровень может достигать 10 8 –10 9 КОЕ/г. Популяционный уровень энтерококков в кишечнике здорового человека остается стабильным, достигая 10 7 –10 8 КОЕ/г фекалий. Энтерококкам отводится существенная роль в стимуляции местного гуморального и клеточного иммунитета, что способствует поддержанию колонизационной резистентности [4]. Количество в кишечнике энтерококков в норме не должно превышать общее количество кишечных палочек. Различные виды энтерококков, обнаруженные у теплокровных, указанные в атласе Koneman E.W. и др. [50], представлены в таблице 1.

Таблица 1. Основные представители рода Enterococcus, выделяемые от человека, животных и птиц [50]

Вид	Характеристика
E. faecalis	Наиболее частый изолят клинических проб из кишечника человека, обнаруживается также в кишечнике домашней птицы, крупного рогатого скота, свиней, собак, лошадей, овец и коз
E. faecium	Выявляется в клинических пробах от людей; более резистентен к антимикробным средствам, чем Е. faecalis; также выявляется в кишечнике разных видов животных
E. avium	Выделяют из кишечника птиц, собак, человека, штаммы могут иметь групповые D- и G-антигены по Лэнсфилду, образуют H2S
E. durans	Редкий клинический изолят: обнаруживают главным образом в молоке и других молочных продуктах
E. casseliflavus	Выявляют в растениях, почве и редко – в фекалиях цыплят; первоначально классифицировали как подвид Е. faecium; продуцирует желтый пигмент, подвижен; может выделяться при инфекциях у человека
E. gallinarum	Изолируют из фекалий цыплят; один из двух подвижных видов Enterococcus; также был изолирован при инфекциях людей, подвергавшихся гемодиализу
E. raffinosus	Первоначально рассматривался как Е. avium (вместе с Е. solitarius и Е. pseudoavium); назван за свою способность продуцировать кислоту из раффинозы; выделяют при инфекциях человека, включая культуры из крови, мочи и абсцессов
E. dispar	Первоначально считали биохимическим вариантом Е. hirae, но анализ сиквенса 16S РНК показал, что он является новым видом; обнаруживают в пробах от человека (в фекалиях, синовиальной жидкости)
E. flavescens	Новый, образующий желтый пигмент подвижный вид; изолирован из проб от человека (крови, абсцессов и гнойного отделяемого больных остеомиелитом)

Морфологические и физиологические свойства. В мазках, приготовленных из бульонной культуры, энтерококки — грамположительные кокки, единичные, парные, в виде небольших скоплений или цепочек. При выращивании на плотной питательной среде в большей степени выражен полиморфизм, проявляющийся как в форме клеток (круглые или вытянутые, иногда в виде коккобактерий), так и в размерах (карликовые и гигантские формы, различные размеры клеток в одной паре или цепочке). Спор и капсул не образуют. Встречаются подвижные варианты, несущие от одного до четырех жгутиков. Энтерококки являются факультативными анаэробами, оптимальная температура культивирования которых составляет 35–37°С. Энтерококки осуществляют метаболизм бродильного типа, ферментируют разнообразные углеводы с образованием в основном молочной кислоты, но не газа, снижая рН до 4,2–4,6. В некоторых случаях восстанавливают нитрат, обычно лактозопозитивные.

Бактерии большинства штаммов энтерококков растут в бульоне, содержащем 6,5% раствор NaCl, при температурах от 10 до 45°С. Каталазоотрицательные, гидролизуют эскулин в присутствии 40% раствора желчи. Некоторые виды энтерококков гидролизуют пирролидонил-β-нафтиламид, за исключением Е. сесоrит, Е. columbae и Е. saccharolyticus. Все штаммы продуцируют фермент лейцинаминопептидазу. Энтерококки хорошо растут на триптиказо-соевом агаре или на агаре, приготовленном на сердечно-мозговом настое, с добавлением к ним 5% крови барана. Некоторые штаммы Е. faecalis проявляют β-гемолитические свойства на агаре, содержащем кровь кролика, лошади или человека, но оказываются негемолитическими на агаровой среде с кровью барана. Часть культур Е. durans являются β-гемолитическими независимо от типа используемой крови.

Для выделения и выращивания энтерококков существует ряд селективных сред: основа кровяного агара с азидом, азидодекстрозный бульон, KF-стрептококковый агар, М-агар для энтерококков, стрептококковый селективный агар и др. На кровяном агаре колонии энтерококков мелкие, кремовые или белые, гладкие с ровным краем, различающиеся по типу гемолиза. Почти все штаммы – гомоферментативные, газа не образуют, конечный продукт ферментации глюкозы и некоторых других углеводов — молочная кислота. Отдельные виды энтерококков разжижают желатин. У энтерококков резко выражены редуцирующие свойства: они обесцвечивают лакмус и метиленовый синий в молоке, редуцируют нитраты в нитриты.

Устойчивость к факторам внешней среды. Энтерококки высокорезистентны к различным факторам внешней среды и дезинфицирующим средствам, могут длительное время сохранять жизнеспособность на предметах домашнего обихода, в течение нескольких месяцев — на обычных агаровых косяках, выдерживают нагревание до 60°С в течение 30 минут.

Энтерококки как причина оппортунистической инфекции

Хорошо известно, что увеличение числа лиц с иммунодефицитными состояниями ведет к нарастанию случаев инфекционных процессов, вызываемых условно-патогенными микроорганизмами, в том числе и энтерококками [5]. В последние десятилетия возросла роль двух видов энтерококков – E. faecalis и E. faeсium – как нозокомиальных патогенов в различных клиниках [26, 33, 62, 73]. Принимая во внимание увеличение числа лиц с иммунодефицитными состояниями, нельзя исключить возможное увеличение спектра видов энтерококков, причастных к патологии у человека.

Недавно была проведена оценка значения энтерококков как возбудителей послеоперационных инфекционных осложнений после операций аортокоронарного шунтирования, реконструктивных операций на сердце и трансплантации почек. Энтерококки изолировали из крови, операционного материала (клапанов сердца), мочи, отделяемого трахеи, ран, плевральной жидкости, внутрисосудистых катетеров. Было изолировано 465 штаммов энтерококков, которые встречались при воспалительных процессах у пациентов отделений трансплантации почек – в 39,8% случаев, затем по показателю высеваемости следовали пациенты реанимационного отделения – 34,6%, сердечно-сосудистой хирургии – 20,4% и материал из операционного блока – 4,2%. Наибольший пул этих микробов изолирован из мочи – в 47,7% и из трахеи – в 24,3%. Энтерококковые бактериемии регистрировались в 9,7%, имея значительный удельный вес среди грампозитивной микрофлоры – 38,5% всех изолятов. Из крови пациентов различных отделений выделено 45 штаммов (E. faecalis – 0,7%, E. faecium – 14,6%).Отмечена высокая степень резистентности энтерококков к антибиотикам [6].

По данным Murray B.E., в 1990 году 80–90% выделенных у человека энтерококков приходилось на долю E. faecalis и 5–10% – на E. faecium [59]. Энтерококки, изолированные при бактериемиях, составили 38,5% от грампозитивной микрофлоры и 9,7% – от всех изолятов энтерококков. По этиологической значимости энтерококки заняли второе место после коагулазоотрицательных стафилококков. Свыше 60% тяжелых энтерококковых инфекций зарегистрированы в отделениях интенсивной терапии [73]. Энтерококки изолированы из крови преимущественно пациентов реанимационного отделения. Другие авторы также указывают на значительную частоту энтерококковых бактериемий: 7–10%, 15,3% [8, 9]. Наряду с другими микробами энтерококки являются возбудителями инфекционных поражений клапанов сердца [28].

Значительное число штаммов энтерококков (n = 113) выделено из отделяемого трахеи пациентов с искусственной вентиляцией легких (ИВЛ), что составило 24,3% от всего пула энтерококков. Эти микроорганизмы выделены только в 1,7% случаев инфекций дыхательных путей [9]. Раневая инфекция, вызванная энтерококками, составила 3%. Наибольший пул энтерококков изолирован из мочи – 222 штамма, что составило 47,7%. Одним из основных возбудителей инфекций мочевыводящих путей является E. faecalis, занимающий второе место после кишечной палочки [1]. Особенно опасны инфекции мочевыводящих путей, вызванные энтерококками, для больных с пересаженной почкой. У E. faecalis описан цитотоксин, вызывающий лизис эритроцитов, нейтрофилов. Штаммы, продуцирующие цитотоксин, проявляют высокую резистентность к химиотерапевтическим препаратам [27]. Обнаружено также, что E. faecalis обладает высокой протеолитической активностью в отношении ряда белков – гидролизирует желатин, казеин, коллаген, гемоглобин и другие белки. Бактерии способны длительно персистировать в мочеполовой системе [1]. Наиболее распространенные заболевания, вызванные энтерококками, представлены в таблице 2.

Таблица 2. Заболевания человека, вызываемые энтерококками

Название заболевания энтерококковой этиологии
Эндокардит
Инфекции кожи и мягких тканей
Инфекции мочеполовой системы
Остеомиелит
Септический артрит
Бактериемии
Инфекции дыхательных путей
Интраабдоминальные инфекции
Эндофтальмит

Энтерококки были названы внутрибольничным патогеном 90-х годов минувшего века [59]. Усиление их роли как нозокомиального патогена в значительной степени обуславливается множественной резистентностью к антибиотикам. Описана устойчивость энтерококков к беталактамным антибиотикам, низким дозам аминогликозидов. В последние годы стала расти их устойчивость к ванкомицину [8, 9, 22, 33, 44]. Факторами риска для распространения ванкомицинустойчивых штаммов являются использование ванкомицина для профилактики, частое применение его для терапии инфекционных осложнений, использование цефалоспоринов III поколения, длительные сроки госпитализации и тяжелое течение заболевания [33].

Роль энтерококков как экзогенного источника инфекции определяется тем, что они длительно сохраняют жизнеспособность на объектах внешней среды, даже в присутствии антисептических растворов. Одной из основных причин распространения энтерококков в стационарах является присущая им природная резистентность к некоторым часто применяемым антибиотикам, в частности к аминогликозидам и цефалоспоринам III поколения, вследствие их селективного давления при назначении больным [8, 9, 22, 33, 73]. Широко распространена резистентность к хлорамфениколу, эритромицину, тетрациклину и клиндамицину. Чувствительные к ванкомицину до 80-х годов прошлого столетия энтерококки к настоящему времени все чаще замещаются ванкомицинрезистентными штаммами. За последние 20 лет заболеваемость, вызванная данными штаммами энтерококков в детских стационарах, возросла более чем в 20 раз [8]. Энтерококки были высокоустойчивы к цефалоспоринам I и II поколений, фторхинолонам, амногликозидам, а также к оксолиновой кислоте. Среди клинических изолятов 70% и более штаммов E. faecalis были чувствительны к ванкомицину, амоксициллину/клавулановой кислоте, имипенему, нитрофурантоину; 51–70% штаммов E. faecium были чувствительны к ванкомицину, нитрофурантоину и нитроксолину [8].

Интенсивные исследования последних лет позволили установить, что данные бактерии синтезируют существенное количество веществ, так называемых факторов вирулентности, способствующих развитию инфекционного процесса. К таким факторам можно отнести поверхностные белки, участвующие в процессе адгезии и инвазии, экскретируемые белки и токсины, обеспечивающие повреждение тканей хозяина, белки, обуславливающие устойчивость к антибиотикам, а также факторы, индуцирующие воспаление (табл. 3).

При этом нельзя не отметить, что многие из так называемых факторов патогенности энтерококков являются необходимыми компонентами их функционирования, обеспечивающими их существование в свойственной им экосистеме, и не связаны напрямую с повреждением тканей хозяина или подавлением системы иммунитета. Так, адгезины жизненно необходимы для нормальной колонизации в желудочно-кишечном тракте, а гидролаза желчных кислот повышает их шансы выжить в двенадцатиперстной кишке. Детальный молекулярно-генетический анализ вирулентных штаммов энтерококков показал, что большинство генов вирулентности локализовано достаточно компактно на геноме данных штаммов. В настоящее время достаточно хорошо установлено, что участки генома с генами вирулентности являются мобильными элементами и могут передаваться от одного штамма другому. Данные генетические элементы, называемые «островами» патогенности, могут содержать различный набор генов вирулентности, включая гены устойчивости к антибиотикам [3, 58]. Большинство исследователей полагает, что именно данные гены наиболее важны для развития энтерококкового инфекционного процесса [70]. На «островах» патогенности обнаруживают комплекс генов цитолизинов cyl, ген адгезина esp, ген поверхностно экспрессируемой сериновой протеиназы spr, гидролазы желчных bhs, гены устойчивости к ванкомицину и ряд других. Однако достоверной связи между каким-либо из факторов в геноме и развитием инфекции показать до сих пор не удалось.

Таблица 3. Факторы патогенности энтерококков

Функция	Фактор	Ген(ы)	Литература
Адгезия и колонизация	Капсула Адгезин Еsp Адгезин Asa Фактор агрегации Адгезин EfaA Рецептор коллагена	cps asa1, 373 esp agg efaA ase	Bentley et al., 2006 Hancock et al., 2002 Nallapareddy et al., 2000 Bensing, Dunny, 1993 Creti et al., 2004
Пенетрация, колонизация, повреждение тканей	Желатиназа Сериновая протеиназа Fsr-регулятор Гиалуронидаза Цитолизин	gelE spr fsr сyl	Qin et al., 2000 Tacao et al., 1997 Gilmore, 1990 Nakayama et al., 2006 Danny et al., 1978
Устойчивость к антибиотикам и микробицидным факторам организма и ингибиция других бактерий	Устойчивость к антибиотикам. Фактор устойчивости к желчным кислотам	tetM, vanA, B, C eryA, B bsh glsB	Roberts et al., 2005 Evers et al., 1993 Manson et al., 2003 Oh et al., 1998 Begley et al., 2005 Dashkevicz et al., 1989 Nannini et al., 2005 Giard et al., 2002
Гемолиз, токсигенность, бактериоциногенность	Гемолизины Цитолизины и бактериоцины Феромоны	hly cylA, B, M cpd, cob, ссf	Ike, Clewell, 199 2 Gilmore et al., 1994 Nakayama et al., 2006 Dunny et al., 1979

Есть ли польза от энтерококков?

Таблица 4. Частота обнаружения энтерококков у млекопитающих и птиц [49]

Вид энтерококков	Человек	Крупный рогатый скот	Свинья	Птица
E. faecalis	++	(+)	+	++
E. faecium	++	++	+	++
E. durans/hirae	(+)	–	(+)	(+)
E. gallinarum	(+)	–	(+)	–
E. casseliflavus	(+)	–	+	–
E. cecorum/columbae	–	+	–	+

• пептид LtnA1 взаимодействует с липидом II мембраны клетки-мишени,
• затем иммобилизованный на липиде II компонент лактоцина LtnA1 взаимодействует с компонентом LtnA2, образуя двукомпонентный комплекс,
• далее С-терминальный конец двукомпонентного комплекса транслоцирует в мембрану с формированием поры, через которую из пораженной клетки выходит наружу содержимое ее цитоплазмы [74].

Следует отметить, что энтероцины широко распространены среди штаммов энтерококков, список которых приведен в таблице 6.

Таблица 5. Штаммы энтерококков, применяемые в пищевой промышленности [36]

Штамм энтерококков	Вид пищевого продукта	Ссылка
E. faecalis B114	Сыр «камамбер»	Sulzer, Busse, 1991
E. faecium 7C5	Сыр Taleggio	Giraffa et al., 1995
E. faecalis INIA 4	Сыр Manchego	Joosten et al., 1995
E. faecalis INIA 4	Сыр Hispano	Garde et al., 199 7
E. faecalis INIA 4	Сыр Manchego	Nunez et al., 1997
E. faecalis INIA 4	Сыр Hispano	Oumer et al., 2001
E. faecium CCM 4231	Сыр Saint-Paulin	Laukova et al., 2001
E. faecium CCM 4231	Испанская колбаса холодного копчения	Callewaert et al., 2000
E. faecium RZS C13	Испанская колбаса холодного копчения	Callewaert et al., 2000
E. faecium CTC49 2	Колбаса твердого копчения	Aymerich et al., 2000
E. faecium CTC49 2	Копченая свинина	Aymerich et al., 2002
E. faecalis TAB 28	Творог	Rodriguez et al., 2001
E. faecium RZS C5	Сыр Cheddar	Foulquie Moreno et al., 2003
E. faecium DPC 1146	Сыр Cheddar	Foulquie Moreno et al., 2003
E. faecium FAIR-E 198	Сыр «фета»	Sarantinopoulos et al., 2002
E. casseliflavus IM 416K1	Итальянская колбаса (Cacciatore)	Sabia et al., 2003

Таблица 6. Некоторые энтероцины, выделенные из энтерококков

Энтероцин	Применение	Ссылка
Enterocin 226 NWC	Сыр Mozzarella	Villani et al., 1993
Enterocin 4	Молочная промышленность	Rodriguez et al., 1997
Enterocin CCM 4231	Корм для скота	Laukova et al., 1998
Enterocin CCM 4231	Соевое молоко	Laukova, Czikkova, 199
Enterocin CCM 4231	Сосиски Hornad salami	Laukova et al., 199
Enterocin CCM 4231	Брынза	Laukova, Czikkova, 2001
Enterocin CRL 35	Козий сыр	Farias et al., 199
Enterocin CRL 35	Мясные продукты	Vignolo et al., 2000
Enterocin CTC 49 2	Мясные продукты	Aymerich et al., 2000
Enterocin CTC 49 2	Свинина копченая	Aymerich et al., 2002
Энтероцины А и В	Закваска «Авена»	Суворов и др., 2003

Энтерококки в составе препаратов и продуктов – пробиотиков

Полезные для человека свойства энтерококков (высокая антагонистическая активность в отношении патогенной микрофлоры, участие в формировании и поддержании иммунитета, участие в нормальном пищеварении, противовоспалительные свойства, витаминообразование) определили их частое использование в медицине в качестве пробиотиков. Под пробиотиками в настоящее время понимают препараты или пищевые продукты, содержащие живые бактерии, которые после попадания в человеческий организм оказывают благотворное воздействие, в первую очередь за счет восстановления нормального микробиоценоза кишечника [4, 7, 29, 37].

Таким образом, пробиотики, содержащие жизнеспособные энтерококки, могут входить в состав пищевых продуктов или фармакологических препаратов. Бактерии, входящие в состав пробиотиков, должны быть способными сохранять жизнеспособность при прохождении желудочно-кишечного тракта, должны подавлять развитие патогенных бактерий, положительно влиять на собственную микрофлору человеческого организма и быть безопасными для человека [68]. Наиболее часто в качестве пробиотиков используют молочнокислые бактерии Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Enterococcus faecium, Enterococcus faecalis, Streptococcus thermophilus, Lactococcus lactis, Leuconostoc mesenteroides, Propionibacterium freudenreichii, Pediococcus acidilactici, Sporolactobacillus inulinus, Escherichia coli, Saccharomyces cerevisiae или Saccharomyces boulardii 37, 42]. Благодаря широкому распространению в природе энтерококки на основе штаммов E. faecium и E. faecalis применяют не только для человека, но и для животных. Так, в 2004 году девять различных штаммов E. faecium были утверждены European Commission (EC) для применения на животных.

Одним из наиболее хорошо исследованных штаммов является E. faecium SF68, который входит в состав ряда фармакологических препаратов. Данный штамм проявил эффективность в клинических исследованиях при лечении диареи, вызванной приемом антибиотиков [74], а также диареи у детей [19]. E. faecium SF68 в клинических исследованиях, проведенных в Бельгии, продемонстрировал эффективность при острой диарее у взрослых [24]. Прием данного пробиотика позволял сокращать продолжительность острой диареи на один – три дня. E. faecium SF68 эффективен и при лечении животных. Так, включение данного штамма в состав корма для собак существенно улучшало как гуморальный, так и клеточный иммунитет [21]. Кисломолочный продукт, содержащий E. faecium SF68 (GAIO, MD Foods, Aarhus, Denmark), в течение длительного времени продается в Дании, причем его исследования показали гипохолестеринемический эффект [13]. В аналогичных исследованиях, проведенных в России с пробиотиком, содержащим штамм E. faecium L3, на больных с хроническими гепатитами, было также показано существенное улучшение целого ряда биохимических параметров, включая уровень холестерина крови и билирубина [12]. Пробиотический продукт, приготовленный на основе соевого молока, содержащий штамм E. faecium CRL 183 в сочетании с Lactobacillus jugurti, также существенно снижал уровень холестерина. Использование другого штамма – E. faecium PR88 (E. faecium Fargo 688® from Quest International, Naarden, Netherlands) продемонстрировало положительное влияние энтерококков у больных с синдромом раздраженной толстой кишки [14]. Данный штамм был добавлен в состав закваски для приготовления пробиотического сыра «чэддер».

Длительный прием (56 недель) пробиотика на основе штамма E. faecium М-74 добровольцами пожилого возраста с патологиями сердца существенно улучшал показатели функционирования сердечно-сосудистой системы, а также иммунологические параметры, характеризующие степень развития атеросклероза [43]. Накоплен существенный опыт длительного клинического применения пробиотика Линекс® (фирма Lek, Словения). Одна капсула Линекс содержит живые лиофилизированные бактерии: не менее 1,2×10 7 Bifidobacterium infantis var. liberorum, Lactobacillus acidophilus и Enterococcus faecium. Входящие в состав пробиотика энтерококки, бифидобактерии и лактобациллы поддерживают и регулируют физиологическое равновесие кишечной микрофлоры и обеспечивают ее физиологические функции (антимикробную, витаминообразующую, пищеварительную) во всех отделах кишечника. Показания: лечение дисбактериозов различной этиологии. Линекс может быть назначен одновременно с антибиотиками и химиотерапевтическими препаратами. Дозы и применение: грудные дети и дети до 2-х лет – по 1 капсуле три раза в день; дети от 2-х до 12 лет – по 1 или 2 капсулы три раза в день; взрослые – по 2 капсулы три раза в день. Длительность лечения зависит от причины развития дисбактериоза и индивидуальных особенностей [2]. Обычный курс применения Линекса – 2–4 недели.

Позитивный эффект пробиотика Симбиофлор (Германия), содержащего энтерококки, подтвержден на огромном клиническом материале (более 2000 пациентов). Препарат был эффективным при таких заболеваниях, как хронический тонзиллит, хронический синусит, хронический бронхит, синдром раздраженного кишечника, острый энтерит (Руш К., Руш Ф. Микробиологическая терапия. – М.: Арнебия, 2003).

Штамм E. faecium Walthers ECOFLOR (Walthers Health Care, Den Haag, Netherlands) проявлял эффективность при диарее, активно подавлял листерии за счет продукции энтероцинов и снижал уровень холестерина крови у пациентов. Исследования данного штамма показали также его противоопухолевый эффект. Интересно, что российский штамм E. faecium L3 также оказался мощным продуцентом энтероцинов А и В, подавляющих как грамположительные, так и грамотрицательные патогенные бактерии [76]. Высокая антагонистическая активность данных энтероцинов позволила существенно ускорить эрадикацию патогенных штаммов H. pylori из желудка и двенадцатиперстной кишки [72]. Благотворный эффект приема данного штамма в составе пробиотиков был также продемонстрирован при лечении онкологических больных [11].

Естественным вопросом, беспокоящим клиницистов, которые назначают пробиотики на основе энтерококков, является опасение, что пробиотический энтерококк после приема будет колонизировать желудочно-кишечный тракт интенсивнее, чем естественные обитатели, и в какой-то момент приобретет устойчивость к антибиотикам (в первую очередь – к ванкомицину) либо набор генов вирулентности. Данное опасение, имеющее под собой логическое основание, при ближайшем рассмотрении представляется фантастическим по целому ряду причин.

Во-первых, молочнокислые энтерококки, входящие в состав пробиотиков, не адаптированы к длительной персистенции в человеческом организме, являясь в своей основе производственными штаммами, исходно селекционированными для создания пищевых продуктов. Так, пробиотический штамм L3 в условиях эксперимента уже через две недели после окончания приема полностью элиминируется из организма [75]. Данное наблюдение указывает на низкую вероятность колонизации пробиотиками такого рода даже в случае передачи им генов лекарственной устойчивости.

Во-вторых, учитывая естественную концентрацию энтерококков в кишечнике человека – 107–108 на грамм кишечного содержимого, нетрудно подсчитать, что для введения сколько-нибудь значимого количества пробиотиков, сравнимого с количеством собственных энтерококков, нужно в сотни раз увеличивать дозы приема. Так, предлагаемая дозировка пробиотика Линекс составляет 0,1–0,2% от естественного количества энтерококков.

В-третьих, исследования штаммов энтерококков, используемых в качестве пробиотиков, выявили их низкий уровень генетической компетентности по сравнению с индигенными штаммами, что также снижает риск приобретения новых генетических маркеров [49]. И что особенно важно, штаммы энтерококков, используемые в клинике, наиболее тщательно отбираются в плане их безопасности, начиная с экспериментов на лабораторных животных и заканчивая наблюдениями за больными. Исследования молочнокислого продукта, содержащего E. faecium SF68, в плане возможной передачи данному штамму устойчивости к ванкомицину, проведенное на добровольцах, не выявили ни одного случая приобретения данного признака штаммом пробиотика [54]. В настоящее время наиболее достоверным критерием, позволяющим охарактеризовать энтерококки в плане их потенциальной патогенности, является наличие у энтерококкового штамма набора генов патогенности (см. табл. 3). Большинство генов патогенности (например, комплекс генов цитолизинов) обнаруживается только у бактериальных клеток Enterococcus faecalis, причем последние располагаются на геноме в пределах «островов» патогенности [3]. У штаммов E. faecium частота обнаружения генов патогенности существенно ниже – наиболее часто удается обнаружить либо гены, кодирующие синтез факторов адгезии, либо гены устойчивости к антибиотикам [58]. Обнаружена закономерная связь между наличием в штаммах энтерококков тех или иных генов патогенности и характером течения патологического процесса [30]. При этом штаммы энтерококков – представители нормальной микрофлоры практически никогда не содержали генов цитолизинов при достаточно высоком содержании факторов адгезии [30]. Энтерококки же, выделенные из пищевых продуктов или штаммов пробиотиков, оказались практически свободными от генов факторов патогенности, за исключением наличия гена gelЕ [32]. В аналогичном исследовании коллекции патогенных штаммов энтерококков по сравнению с пробиотическим штаммом L3 было показано, что данный штамм также не содержит генов патогенности, выбранных для исследования [51]. В недавно проведенном исследовании клинических штаммов энтерококков (собственные данные авторов), выделенных от больных, принимавших пробиотик Линекс, было установлено, что ни один из этих штаммов не имел генетических характеристик, свойственных штамму E. faecium, входящему в состав препарата Линекс, а бактерии пробиотического штамма не содержали известных генов патогенности, детектируемых с помощью ПЦР (табл. 7).

Таблица 7. Анализ клинических штаммов энтерококков на предмет наличия генов патогенности

Образец	1	2	3	4	5	6	7	8	9	10	11	12	13	14	15	К
Праймеры
E. faecalis	+	–	–	–	–	–	–	–	+	–	+	+	+	+	–	–
E. faecium	+	+	–	–	+	+	+	–	+	+	+	+	+	–	+/–*	–
gelE	+	+/*–	–	–	–	–	+/–*	–	–	–	+	+	+	+	–	–
еsp	+	+	–	–	–	–	–	–	+	–	+/–*	+/–*	–	–	–	–
sprE	+	–	–	–	–	–	–	–	–	–	+	–	+	–	–	–
fsrB	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	+	–	+	–	–	–
аsa1	+	–	–	–	–	–	–	–	–	–	+	+/–*	+	+	–	–
cylA	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–
cyIM	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–	–
efaA	+	–	–	–	–	–	–	–	–	–	+	–	+	–	–	–

* Размер ампликона отличен от ожидаемого, штамм № 5 соответствует штамму E. faecium, входящему в состав препарата Линекс, штамм № 6 соответствует другому штамму SF68, использованному в качестве контроля.

Как уже отмечалось, энтерококки с давних времен применяются для производства и сохранения пищевых продуктов – за счет их способности ферментировать лактозу и угнетать развитие патогенных бактерий. В настоящее время российские исследователи пытаются выделить пробиотические и пищевые энтерококки в новый вид микроорганизмов – Enterococcus lactis [23].

Послесловие

Приведенные нами данные литературы указывают на неоднозначную роль энтерококков в жизни человека. Энтерококки широко распространены в природе. Они являются представителями резидентной нормальной микрофлоры человека и животных, встречаются в пищевых продуктах, воде, растениях, у животных, птиц и насекомых. У людей, как и у животных, они обитают в кишечнике, женском генитальном тракте, реже в уретре мужчин, могут колонизировать слизистые оболочки полости рта и кожу, особенно в условиях стационаров.

Некоторые штаммы данных микроорганизмов, приобретя ряд признаков патогенности, могут вызывать серьезные инфекционные заболевания, а другие штаммы служат необходимым компонентом нормального микробиоценоза. Ключевым критерием для отдифференцировки энтерококков, полезных для человека, от энтерококков патогенных является наличие или отсутствие у штамма энтерококков набора генов патогенности.

Важное значение имеет определение у клинических изолятов Е. faecalis и Е. faecium генов, контролирующих синтез известных факторов патогенности: Esp, Asa1 и EfaA – поверхностные белки, участвующие в процессе адгезии и инвазии; CylA и CylM – цитолизины; GelE – желатиназа; SprE – сериновая протеиназа и FsrB – феромон. Некоторые штаммы Е. faecalis обладают гиалуронидазной активностью. Энтерококковый цитолизин поражает эритроциты и некоторые эукариотические типы клеток, в то время как бактериальный феромон является низкомолекулярным пептидом, способствующим конъюгативной передаче плазмидной ДНК от штамма к штамму. Существует предположение, что этот феромон может действовать как хемоаттрактант для нейтрофилов, способствуя усилению воспалительного ответа на инфекцию. Более того, у клинических штаммов E. faеcalis обнаружена плазмида, кодирующая синтез поверхностного белка, сообщающего способность энтерококкам к интернализации клетками кишечного эпителия, культивируемыми in vitro [63].

Следует указать, что энтерококки редко являются причиной инфицирования у здоровых лиц. Только при значительном снижении резистентности макроорганизма, и особенно при травмах кишечника или мочеполового тракта в результате инструментальных исследований, они могут проникать в стерильные в нормальных условиях органы и ткани организма хозяина, вызывая оппортунистические инфекции мочевыводящих путей, бактериемию, сепсис, подострый септический эндокардит, инфекции желчных путей или абсцессы в брюшной полости.

Лабораторная диагностика. Для выделения энтерококков применяют стандартные методы получения проб крови, мочи, отделяемого ран и других видов клинического материала, используя при необходимости стерильные ватные тампоны. Для доставки материала в лабораторию возможно использование любой транспортной среды или сухого тампона. Посев проб должен быть осуществлен как можно скорее после их получения, предпочтительнее в течение одного часа. Лабораторную диагностику энтерококковых инфекций осуществляют с использованием бактериологического метода исследования, предусматривающего посев патологического материала на питательные среды с последующим выделением чистых культур, подозрительных на энтерококки. Используют энтерококк-агар производства ГНЦ ПМ (Оболенск) или производства ФГУП «Аллерген» (Ставрополь), Enterococcus Agar или HiCrome UTI Agar (М1353) фирмы HiMedia (Индия). Следует отметить, что на чашках с хромогенным агаром HiCrome UTI возможно дифференцировать одновременно колонии Enterococcus faecalis (голубовато-зеленого цвета), Escherichia coli (пурпурного цвета), Staphylococcus aureus (бесцветные колонии) и Klebsiella pneumoniae (мукоидные колонии голубого цвета). Для последующей видовой идентификации колонии, типичные для энтерококков, отвивают на азидовый агар. Выделенные штаммы дифференцируют с гемолитическими и зеленящими стрептококками. Идентификацию проводят с помощью физиолого-биохимических тестов.

Первый день: посев поступившего на исследование клинического материала производят принятыми при диагностике стрептококковых инфекций методами с использованием питательных сред.

• просматривают первичные посевы на чашках с кровяным агаром. Энтерококки образуют мелкие кремовые или белые, круглые, с ровными краями глянцевые колонии с α-, β-гемолизом или негемолитические;
• из колоний с признаками, характерными для энтерококков, бактериологической петлей берут небольшое количество материала и готовят мазки для окраски по Граму. При микроскопическом исследовании энтерококки представляют собой грамположительные полиморфные кокки, располагающиеся короткими цепочками или небольшими скоплениями, что определяет необходимость дифференцировать их с гемолитическими и зеленящими стрептококками;
• колонии, характерные для энтерококков, высевают и в бульон для получения чистой культуры, необходимой нейшей идентификации.

Идентификация видовой принадлежности энтерококков

Первый день: суточную бульонную культуру энтерококка

• на желчно-щелочной агар (ЖЩА);
• в молоко с 0,1% раствором метиленового синего.

• если на ЖЩА есть рост в виде круглых, блестящих, синеватого цвета, слегка выпуклых колоний, которые случаев появляются на третьи сутки инкубирования при 37°С, исследуемая культура подозрительна на
• в пробирках с молоком энтерококки редуцируют вследствие чего уже через 16–20 часов после посева в термостате цвет среды изменяется с голубого на Способность микробных культур к росту на ЖЩА 0,1% раствором метиленового синего в молоке указывает ность исследуемой культуры к энтерококкам. Идентификация принадлежности энтерококков и определение спектра к антибактериальным препаратам и действию лечебного могут быть необходимы для назначения больному адекватной иногда и в эпидемиологических целях. Известно, что проявляют более выраженную резистентность к пенициллину циллину, чем культуры Е. faecalis. Резистентность к наиболее часто определяется у Е. faecium. Идентификацию рококков осуществляют с помощью биохимических тестов. Более 80% энтерококков реагируют с антисывороткой по Лэнсфилду.

Молекулярно-генетическая идентификация ДНК

Используются праймеры к трем группам генов:

• для видовой идентификации – позволяющие дифференцировать штаммы E. faecium и Е. faecalis;
• гены поверхностных белков-адгезинов (esp, asa1, efaA);
• гены, кодирующие синтез цитолизинов (cylA, cylM), желатиназы (gelE), сериновой протеиназы (sprE) и феромона (fsrB).

Праймеры, рекомендуемые для выявления генов, ассоциированных с патогенностью изолятов Еnterococcus faecalis и Еnterococcus faecium, приведены в таблице 8.

Выбор данных праймеров обусловлен принятыми в современной научной литературе стандартными подходами, позволяющими отличить патогенные штаммы энтерококков от апатогенных.

Таблица 8. Праймеры, используемые для выявления генов, ассоциированных с патогенностью энтерококков

Название гена		Последовательность ДНК праймеров (5’ to 3)	Размер ампликона (нп)
gelE	gelE 1	ACCCCGTATCATTGGTTT	419
	gelE 2	ACGCATTGCTTTTCCATC
esp	esp 1	TTGCTAATGCTAGTCCACGACC	93
	esp 2	GCGTCAACACTTGCATTGCCGAA
sprE	sprE 1	GCGTCAATCGGAAGAATCAT	233
	sprE 2	CGGGGAAAAAGCTACATCAA
fsrВ	fsrB 1	TTTATTGGTATGCGCCACAA	316
	fsrB 2	TCATCAGACCTTGGATGACG
asa1	asa1 1	CCAGCCAACTATGGCGGAATC	529
	asa1 2	CCTGTCGCAAGATCGACTGTA
cylA F	t56	ACTCGGGGATTGATAGGC	688
	R	GCTGCTAAAGCTGCGCTT
E. faecalis	F t54	TCAAGTACAGTTAGTCTTTATTAG	941
	R	ACGATTCAAAGCTAACTGAATCAGT
E. faecium	F t54	TTGAGGCAGACCAGATTGACG	658
	R	TATGACAGCGACTCCGATTCC
cylM	F	GATTGGAATGTGGGAATCCTAA	825
	R	ACTTCCGGCAACCTTTAGTGTA
efaA	F	CGTTAGCTGCTTGCGGGAATC	735
	R	CCATACTACGTTTATCGACAC

Лечение и профилактика. Многочисленные исследования свидетельствуют о свойственной энтерококкам резистентности к широкому спектру антибактериальных препаратов. Чувствительность к действию антибиотиков двух наиболее часто выделяемых при инфекциях человека видов — Е. faecalis и Е. faecium — различна. Известно, что около 90% штаммов Е. faecalis и около 50% штаммов Е. faecium чувствительны к ампициллину. При резистентности энтерококков к ампициллину необходимо использовать ванкомицин. Неосложненные инфекции мочевыводящих путей лечат ампициллином, тетрациклином или хинолонами. При системных инфекциях энтерококковой природы, опасных для жизни, целесообразно использовать антибиотики, действующие на клеточную стенку, такие как пенициллин, ампициллин или ванкомицин, в сочетании с аминогликозидами (гентамицином или стрептомицином) или хлорамфениколом. Однако выбор наиболее эффективной комбинации антибиотиков для лечения системных энтерококковых инфекций возможен только после предварительного определения in vitro антибиотикорезистентности выделяемых в каждом конкретном случае культур энтерококков. Интенсивная терапия антибиотиками, не эффективными в отношении энтерококков, может способствовать возникновению генерализованных энтерококковых инфекций, уничтожая нормальную микрофлору, конкурирующую с энтерококками, с одной стороны, и оказывая иммуносупрессивное действие — с другой. Учитывая рост в последние годы внутригоспитальных инфекций, вызываемых полирезистентными энтерококками, появляющимися в результате селекции в связи с широким использованием антибиотиков в стационарах, важнейшим фактором предупреждения нозокомиальных энтерококковых инфекций следует признать четко обоснованное применение антибиотиков.

Пробиотические препараты. Энтерококки и кишечные палочки явились основой первых препаратов-пробиотиков, производство которых было налажено в Европе в середине 20-х годов прошлого столетия. Следует отметить, что при заселении кишечника колиподобной микрофлорой и энтерококком наблюдается образование колоний только на поверхности слизистой оболочки, выявляемых гистологически (Savage et al., 1968). В настоящее время существует довольно большая группа пробиотических препаратов, включающих симбиотические штаммы энтерококков и оказывающих благотворное воздействие на человеческий организм.

Особенно ценными свойствами этерококков являются:

• высокая антагонистическая активность в отношении патогенной микрофлоры,
• участие в формировании и поддержании иммунитета,
• участие в нормальном пищеварении,
• противовоспалительные свойства,
• витаминообразование,
• восстановление нормального микробиоценоза кишечника [4, 7, 29, 37, 76].

Ярким представителем энтерококксодержащих средств, представленных на российском рынке, является препарат Линекс, высокая пробиотическая эффективность которого подтверждена длительным опытом клинического применения как в нашей стране, так и за рубежом.

Важное значение имеет определение у клинических изолятов Е. faecalis и Е. faecium генов, контролирующих синтез известных факторов патогенности: Esp, Asa1 и EfaA – поверхностные белки, участвующие в процессе адгезии и инвазии; CylA и CylM – цитолизины; GelE – желатиназа; SprE – сериновая протеиназа и FsrB – феромон. Некоторые штаммы Е. faecalis обладают гиалуронидазной активностью. Энтерококковый цитолизин поражает эритроциты и некоторые эукариотические типы клеток, в то время как бактериальный феромон является низкомолекулярным пептидом, способствующим конъюгативной передаче плазмидной ДНК от штамма к штамму. Существует предположение, что этот феромон может действовать как хемоаттрактант для нейтрофилов, способствуя усилению воспалительного ответа на инфекцию. Более того, у клинических штаммов E. faеcalis обнаружена плазмида, кодирующая синтез поверхностного белка, сообщающего способность энтерококкам к интернализации клетками кишечного эпителия, культивируемыми in vitro [63].

Энтерококки — повсеместно распространенные грамположительные бактерии, активно живущие в окружающей среде и теле человека. Они относятся к группе стрептококковых микробов, обитающих в кишечнике теплокровных. Род Enterococcus включает бактерии, необходимые человека для нормальной жизнедеятельности, здорового пищеварения и функционирования всего организма, а также микробы, которые являются потенциально опасными и при определенных обстоятельствах могут вызывать различные патологии. Чтобы они проявили свои патогенные качества, необходимы благоприятные условия – снижение иммунной защиты.

Бактерии заселяют слизистую оболочку тонкого и толстого кишечника, уретры, половых органов. Процесс колонизации начинается с момента появления ребенка на свет. Более активно он протекает у детей, находящихся на естественном вскармливании. Основные представители данного рода – Enterococcus faecalis и Enterococcus faecium. Эти виды в определенном количестве входят в состав нормальной микрофлоры человека и оказывают положительное влияние на процессы жизнедеятельности. Под воздействием негативных эндогенных или экзогенных факторов бактерии начинают активно размножаться. Когда их количество значительно возрастает, возникает дисбактериоз или развивается патологический процесс.

Enterococcus spp. являются возбудителями заболеваний органов мочевыделительной системы, раневых и внутрибольничных инфекций, патологических процессов в брюшной полости. Они вызывают эндокардиты, холециститы, панкреатиты, циститы, уретриты, пищевые токсикоинфекции.

Энтерококки относятся к санитарно-показательным микроорганизмам — используются для оценки санитарного состояния сточных вод, почвы, продуктов питания. Эти бактерии являются высокочувствительными показателями свежего фекального загрязнения воды и водных объектов, поскольку они не размножаются вне организма теплокровных.

Энтерококки имеют схожие физиологические свойства со стрептококками. Благодаря этому их изначально относили к роду стрептококков. В настоящее время их выделяют в отдельный род Enterococcus.

Эпидемиология

Заражение младенцев происходит в роддоме в первые минуты жизни, когда их прикладывают к груди матери. Заселение кишечника энтерококками у детей, находящихся на искусственном вскармливании, происходит намного сложнее и дольше. Они получают микробов с окружающих предметов, воздуха и рук персонала.

В организме распространение инфекции происходит из ЖКТ в другие локусы и органы. Заражение энтерококком от других людей встречается крайне редко.

Enterococcus faecalis обнаруживается у больных в 90% случаев , а Enterococcus faecium — в 10%. Количество всех остальных видов энтерококков в кале человека настолько мало, что не представляет никакого интереса для микробиологов и не имеет никакой практической значимости для медицины в целом. Иные виды энтерококков являются заносными и непатогенными, не опасными в плане здоровья.

Пути проникновения энтерококков в организм человека:

• Грудное вскармливание,
• Нарушение целостности кожного покрова — раны, порезы,
• Употребление обсемененных продуктов,
• Грязные руки, недостаточный уход за половыми органами.

Факторы, провоцирующие развитие энтерококковой инфекции:

• Дисбактериоз на фоне приема антибиотиков,
• Гормональный сбой,
• Иммунодефицит,
• Эмоциональное перенапряжение,
• Вирусная инфекция,
• Тяжелые хронические недуги – сахарный диабет,
• Нерациональное питание,
• Гиповитаминоз,
• Пожилой возраст,
• Алкоголизм,
• Гормонотерапия, лечение цитостатиками,
• Иммуносупрессия после пересадки органов,
• Облучение,
• Длительное нахождение человека в небольших замкнутых пространствах или экстремальных условиях,
• Инвазивные инструментальные исследования,
• Младенческий возраст,
• Гипоксия в родах,
• Недоношенность, внутриутробное инфицирование, врожденная патология ЖКТ.

Энтерококки, размножаясь и достигая значительного количества в организме человека, способны вызвать следующие заболевания:

• Воспаление органов мочевыделительной системы — цистит, уретрит;
• Воспаление различных отделов кишечника — дивертикулит, энтерит, перитонит, аппендицит, парапроктит;
• Воспаление мозговых оболочек — менингит;
• Эндокардит, бактериемия, сепсис.

Диагностика

Основным диагностическим методом энтерококковой инфекции является микробиологический. В лаборатории проводят исследование отделяемого влагалища на микрофлору, анализ кала на дисбактериоз, бакпосев мочи.

Микробиологическое исследование отделяемого влагалища проходит в несколько этапов. Сначала отбирают биоматериал. Делают это гинекологи в стационаре или поликлинике стерильным ватным тампоном. В течение 2 часов пробирки доставляют в баклабораторию, где непосредственно переходят к исследованию. Засевают материал на твердые питательные дифференциально-диагностические среды — кровяной агар, энтерококкагар и другие, а также в сахарный бульон для подращивания. На следующий день изучают характер роста. В сахарном бульоне энтерококки дают интенсивный рост в виде диффузного помутнения среды. Энтерококки, способные вызвать патологический процесс растут на кровяном агаре с выраженной зоной гемолиза. Колонии микроскопируют. Для подтверждения принадлежности культуры к роду энтерококков петлей делают посев в молоко с метиленовой синькой и на желточно-солевой агар. Метиленовую синь они редуцируют, изменяя цвет на кремовый.

Энтерококкагар — это селективная среда, на которой фекальный энтерококк растет в виде красно-коричневых колоний без ободка, а E.faecium — со светлым ободком вокруг каждой колонии. На этой среде производят подсчет колоний каждого типа и определяют степень роста энтерококков во влагалище. Если имеется рост только в жидкой среде, это первая степень роста — очень скудный рост; рост единичных колоний на плотной среде — вторая степень, скудный рост; от 10 до 100 колоний на среде — 3 степень, умеренный рост; более 100 колоний — обильный рост, 4 степень. Первая и вторая степень роста не свидетельствует в пользу воспалительного процесса, вызванного энтерококками. При 3 и 4 степень роста больным требуется лечение.

Бакпосев мочи первоначально осуществляется на кровяной агар, мясо-пептонный агар и сахарный бульон. После выявления подозрительных колоний на кровяном агаре, их изучают по той же схеме — микроскопия, дополнительные тесты, подсчет колоний.

Анализ кала на дисбактериоз проводится не ранее, чем через 7-10 дней после прекращения антибиотикотерапии. За три дня до обследования назначается общий стол. Фекалии забирают при помощи стеклянной стерильной палочки из глубины исследуемого материала, после естественной дефекации в стерильную посуду, у новорожденных — с пеленки. Материал исследуют не позднее 2 часов от момента забора. При получении материала в лаборатории производят повторное взвешивание пробы и определяют ее истинный вес. В зависимости от веса пробы добавляют физраствор, чтобы получилось разведение 1:10, тщательно эмульгируют и засевают в накопительные и селективные питательные среды. Энтерококки растут на молочно-ингибиторной среде и энтерококкагаре. На этих средах подсчитывают количество выросших колоний, изучают их морфологию и устанавливают видовую принадлежность. После проведения окончательной идентификации результаты оценивают по специально разработанным формулам, сравнивают их с нормативными показателями и делают выводы о том, какая степень дисбиоза у данного больного.

Профилактика

Профилактические мероприятия направлены на укрепление иммунитета, правильное питание, отказ от вредных привычек, ведение активного образа жизни, занятия спортом, закаливание.

• Соблюдать правила личной гигиены – мыть с мылом руки перед едой и после посещения общественных мест.
• Употреблять в пищу полезные продукты.
• Избегать конфликтных ситуаций и эмоционально не напрягаться.
• Защищать организм от переохлаждения.
• Соблюдать режим труда и отдыха.
• Высыпаться.
• Не принимать бесконтрольно антибиотики и любые другие препараты.
• Увеличить двигательную активность.
• Своевременно лечить имеющиеся хронические болезни.

Энтерококки, размножаясь и достигая значительного количества в организме человека, способны вызвать следующие заболевания:

Давайте будем совместно делать уникальный материал еще лучше, и после его прочтения, просим Вас сделать репост в удобную для Вас соц. сеть.